UV-inaktiváció:
egy hullámhossz,
széleskörű felhasználás
Ultraibolya sugárzással teljesen megszünthetÅ‘ a vírus fertzÅ‘képessége. Hozzáadott érték, hogy mindezt vegyszer-és adalékmentesen, pár másodperc alatt végezzük.
A fehérjék épek, az RNS mérhetÅ‘.
Az általunk alkalmazott UV-C besugárzás elÅ‘nyei
0% fertÅ‘zés
A vírus teljesen inaktivált, normál mikrobiológiai környezetben kezelhetÅ‘. 5 különbözÅ‘ eljárással ellenÅ‘rizve.
ép fehérjék
Nincs kimutatható különbség az aktív és UV-inaktivált virális fehérjék mennyiségében. (ELISA)
Az eredetivel megegyezÅ‘ sejtes folyamatok. (immuncitokémia, flow)
akár változatlan nukleinsav
Az inaktiválási határon nincs érdemi RNS mennyiség változás (RT-qPCR). Több besugártzással követÅ‘en 1-2 Cq.
Vírustisztítás
Vírustisztítási eljárás
AnioncserélÅ‘ mágneses gyöngyös tisztítási technológia továbbfejlesztésével kialakítottunk egy saját vírustisztítási eljárásrendet, amely aspecifikusan, nagyfokú tisztaságra és jelentÅ‘s visszanyerésre ad lehetÅ‘séget a vírusizolátum 20x-os betöményítése mellett. Az arany standardnak számító ultracentrifugával történÅ‘ gradiens centrifugálással szemben, a módszer idÅ‘igénye 30 perc. A veszteség 40%. A visszanyerés az RNS-mennyiség tekintetében 60-70% (RT-PCR). A tisztasági mutató összfehérje szempontjából 96% (BCA assay). Transzmissziós elektronmikroszkópos vizsgálattal ép virionokra jellemzÅ‘ képet láttunk. Az általunk vizsgált minták sejtes felülúszók, komplex biológiai minta (pl. vérszérum) esetén a minta elÅ‘kezelése válhat szükségessé.
Módszerünk elÅ‘nyei:
-
gyorsan kivitelezhető (30 perc)
-
funkcionális szempontból megfelelÅ‘ tisztaságot eredményez (nincs citopátia, sejtek vizsgálhatóak, elektronmikroszkópos kép vártnak megfelelÅ‘)
-
optimalizálható maximális visszanyerésre/maximális koncentrálásra (75%, vagy 11,5x-ös koncentrálás)
-
nem igényel jelentÅ‘s eszközhátteret (egyszerű asztali asztalicentrifugával rendelkezÅ‘ laborban kivitelezhetÅ‘)
A kifejlesztett vírustisztítási technológiát tudományos együttműködés keretében kollaborációban nyújtottuk egyetemi partnernek (Pannon Egyetem), valamint PTE kutatócsoportnak.
Immunválasz vizsgálatok
A COVID-19-re, mint a legtöbb vírusbetegségre, szervezetünk antitestek termelésével és speciális immunsejtek kiképzésével reagál. Ezt az immunreakciót kívánják a vakcinák is kialakítani – csupán a betegség nélkül. A vírus által kiváltott antitestes immunválasz mérésekor a hagyományos szerológiai vizsgálatban (ELISA) csupán a vírus egy-egy antigénjének részletére adott antitestválaszt mérik. Ezzel szemben a mi módszerünk újfajta eljárás: a teljes vírussal, minden antigénjével szemben kialakult antitestkészletet tudjuk mérni. Így a természetben is lejátszódó folyamatokat tudjuk laboratóriumi körülmények között lemérni: hiszen a nyálkahártyákon, vagy a testünk más szöveteiben is a teljes vírussal találkozik az immunrendszerünk. Találtunk olyan emberek vérében is jelentÅ‘s antitestválaszt, akik nem tudták, hogy átestek a betegségen és oltást sem vettek fel. Az Å‘ vérük könnyen lehet, hogy a legkitűnÅ‘bb terápiás vérkészítményt szolgáltatta volna, mégsem tudták sem Å‘k, sem az orvosok, hogy alkalmasak lehetnek. Az eljárással eddig nem látott dimenzióit tárhatjuk fel a koronavírus ellenes antitestválasznak.
A COVID-19 által kiváltott sejtes immunválaszt szintén a természetes immunfolyamatok döntÅ‘ pillanatának elkapásával mérjük. Vérvétel után fehérvérsejteket gyűjtünk és magával a koronavírussal keverjük össze. UV-inaktivált koronavírust használunk, mely az aktív vírustól egy fontos aspektusban azonban különbözik: nem fertÅ‘z. Fehérjei azonban nem sérültek, így ugyanúgy viselkedik, mint a fertÅ‘zÅ‘ vírus. Fehérvérsejtekkel történÅ‘ keveréskor sejtes szinten a vérünkben található természetes immunsejtek feldolgozzák a koronavírust, majd professzionális immunsejteknek mutatják be – szinte megkérdezik: találkoztál-e már a vírussal? Gondoljunk bele: amennyiben sejtjeink felismerik a vírust, úgy rendelkezünk sejtes immunválasszal. A megoldás egyszerűségében az is benne rejlik, hogy a teljes vírusra adott immunválaszt, teljes egészében a vizsgált személyre szabva mérjük.
A gyakorlati lehetÅ‘ség számos: korábban nem ismert fertÅ‘zés megállapítására, konvaleszcens plazmaterápiában alkalmazhatják a megfelelÅ‘ donorok válogatására, vagy a vakcinák immunválaszának mérésére lehet alkalmazható. Fontos megjegyezni, hogy vizsgálataink közepes elemszámú klinikai vizsgálatban bizonyították az eljárás létjogosultságát. Ahhoz tehát, hogy széles körben alkalmazni lehessen, nagy számú klinikai vizsgálatban szükséges tesztelni.